前言：超高通量組織研磨儀使樣品均質化更徹底，方便后續(xù)萃取;真空離心濃縮儀濃縮樣品，方便快捷。

青霉素 G(Penicillin G)作為β-內酰胺類抗生素對于人和動物尿道、胃腸道和呼吸道感染等疾病具有較好的治療優(yōu)勢。[1]但是在獸用治療中的用藥不規(guī)范會導致藥物在奶和動物組織中的殘留，這些藥物殘留及其代謝產物會對有相關過敏史的人產生健康危害。

超高效液相色譜-質譜法（UPLC-MS）是一種將超高效液相色譜（UPLC）與質譜（MS）結合的高效且精準的分離檢測技術。[2]相關研究中采用超高效液相色譜串聯質譜法同時測定了肉類中青霉素 G及其代謝產物芐青霉噻唑酸、芐青霉去羧噻唑酸和芐青霉二酸的方法。

在此基礎上，我們對該實驗方法加以改良與補充，通過超高通量組織研磨儀576對樣品進行研磨提取操作，該方法提取質量高，效果均一，無交叉污染，并經真空離心濃縮樣品，后續(xù)通過超高效液相色譜串聯質譜法，靈敏快速地對樣品進行檢測分析。

實驗步驟：

1、稱取處理成小塊的組織樣品于50mL研磨管中，加入青霉素V內標[3]，加2mL水，乙腈定容至20mL，經超高通量組織研磨儀研磨提取。

2、離心后取10mL上層清液，經真空離心濃縮至蒸干。

3、蒸干后加入2mL乙酸銨緩沖溶液溶解殘余物，渦旋15s，加入5mL正己烷，渦旋1min，轉移至50mL離心管中，離心去除上層有機相，正己烷重復去脂一次。4、吸取1mL水相于2mL聚丙烯離心管中，離心后過水相濾膜，待測。

5、另取7支離心管中分別按標準曲線的濃度加入適量標準溶液，再加入等量空白樣本，混勻，放置10min后，與樣品一起處理，制作工作曲線系列。

[1]注：本實驗方法僅供參考，具體詳細參數可查閱相關文獻確定。

實驗方法優(yōu)勢：

在UPLC-MS方法中，樣品處理液中強極性和弱極性雜質成分使用六通切換閥切換至廢液而不進入質譜儀，分析多份樣品后不需清洗質譜儀的樣品錐，同時采用基體匹配標準內標法定量，有效補償了基體效應。[1]

在此基礎上通過超高通量組織研磨儀和真空離心濃縮儀進行優(yōu)化實驗步驟，超高通量組織研磨儀使樣品均質化更徹底，方便后續(xù)萃?。徽婵针x心濃縮儀補充了溶液蒸發(fā)過程中的爆沸，減去了添加飽和NaCl的步驟，減少后續(xù)離子干擾，使本實驗方法更快速安全，靈敏準確。

文中所用儀器：

1、真空離心濃縮儀

真空離心濃縮儀可用于化學、生物、醫(yī)藥等領域的樣品制備和分析，在生命科學領域中，真空離心濃縮儀常用于分離和濃縮蛋白質、核酸和其他生物分子。真空離心濃縮是一種將溶劑蒸發(fā)出去以濃縮或干燥生物(非生物)樣品的過程。采用離心力、真空和加熱相結合的方法使樣品中的溶劑快速蒸發(fā)，從而達到濃縮樣品的目的，方便后續(xù)實驗的分析和檢測。

2、超高通量組織研磨儀

超高通量組織研磨儀是一類性能穩(wěn)定，處理通量高，重復性好的研磨設備，可任意定制各種規(guī)格適配器，廣泛應用于組織破碎，生物活性物質提取等領域。

參考文獻：

[1]劉創(chuàng)基,王海,杜振霞,等.超高效液相色譜-串聯質譜法同時測定牛肉中青霉素類藥物及其代謝產物[J].分析化學,2011,39(05):617-622.

[2]胡瑞雪.食品殘留青霉素的熱解產物青霉噻唑酸的毒性分析與評價[D].吉林大學,2024.DOI:10.27162/d.cnki.gjlin.2024.002900.

[3]European Commission，Council Regulation ( EEC) ． 2377 /90 /EC． Off． J． Eur． Commun． ，1990，L224: 1